22.11.2012

Нозематоз медоносных пчёл на пасеках России

Нозематоз медоносных пчёл на пасеках России

Зинатуллина З.Я.1, Жигилева О.Н.2, Игнатьева А.Н.3, Токарев Ю.С.4
1 ВНИИ ветеринарной энтомологии и арахнологии РАСХН, г. Тюмень, nosema4@mail.ru
2 Тюменский государственный университет, г. Тюмень
3 ВНИИ защиты растений РАСХН, г. Санкт-Петербург
 

Оценивая результаты зимовки, пчеловоды нередко обнаруживают ослабленные пчелиные семьи, сырость внутри гнезда, опоношенность внутренних стенок улья, а в некоторых случаях гибель маток. Причиной такого состояния может быть бактериальная кишечная инфекция, недоброкачественные корма в период зимовки, а также классическое проявление нозематоза. Для уточнения диагноза необходимо исследовать пробы пчел на нозематоз, а корма на падь и наличие веществ токсичных для пчел.

Впервые на возбудителя этого заболевания обратил внимание Денгофф-Лейкарт, который в 1857 году принял их за споры грибов. В 1863 году Лейдик выявил их сходство по форме со спорами пебрины шелковичного червя - Nosema bombycis. В 1906 и 1907 гг. почти одновременно возбудителем заинтересовались английские исследователи и Е. Цандер. (Цандер, 1927). В 1909 году Е. Цандер опубликовал статью с описанием возбудителя Nosema apis.(Zander, 1909). До 70-х годов было проведено много исследований вышеназванного патогена пчёл. В 1996 г. был описан новый возбудитель нозематоза — Nosema ceranae (Fries et al., 1996), выделенный из дальневосточной пчелы Apis cerana. С начала 2000 годов по всему миру прокатилась волна гибели пчелиных семей. (Higes et al., 2005; Chauzat, 2005). В России на эту проблему пчеловоды обратили внимание в 2002 году (Сотников, Гробов, 2003), когда на многих пасеках наблюдался «осенний слет» пчел. При анализе причин такого явления наряду с варроатозом, вирусными заболеваниями и отравлениями, не исключалось патогенное воздействие нового возбудителя нозематоза – N. ceranae (Higes et al., 2005). N. ceranae распространен почти во всем мире (Higes et al., 2005; Fries et al., 2010; Klee et al., 2007; Paxton et al., 2007; Chen et al., 2008; Chauzat, 2005). По мнению ряда авторов, вновь выявленный возбудитель нозематоза вытесняет N. apis из популяции медоносных пчел (Klee et al., 2007; Paxton et al., 2007). Исследования показывают, что N. ceranae уже длительное время существовал на пасеках: в США с 1995 года (Chen et al., 2008), в Европе (Финляндии) с 1998 года (Paxton et al., 2007).

В настоящее время в России в ветеринарных лабораториях нозематоз диагностируют в соответствии с официально утвержденными «Методическим указаниям по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчёл», утвержденными 25 апреля 1985 года.

При работе с пчелами, зараженными возбудителями нозематоза, мы обнаружили, что споры различаются по форме и размерам, и предположили их принадлежность к двум разным видам. В связи с этим мы провели их морфометрию и генотипирование.

Морфометрические исследования окрашенных мазков из водной суспензии брюшек пчел показали наличие двух отчетливо различимых типов спор микроспоридий в пчелах Тюменской области. Первый тип спор – широкие, овальные, 4,92 х 2,78 мкм (n=100). Споры второго типа узкие, овальные, некоторые с заостренным концом, 4.24 × 2.16 мкм (n=80). Пробы ДНК, выделенные из спор первого типа, дают положительную реакцию с праймерами Apis 312-F/R (Martín-Hernández, 2007) и не реагируют с праймерами Mitoc 218-F/R (Martín-Hernández, 2007), что соответствует диагнозу N. apis. Размер амплифицированного фрагмента соответствует ожидаемому – около 300 п.н.  И, наоборот, пробы ДНК спор второго морфотипа дают положительную реакцию с праймерами Mitoc 218-F/R и не дают с праймерами Apis 312-F/R, что соответствует диагнозу N. ceranae. Размер амплифицированного фрагмента также соответствует ожидаемому – около 200 п.н. Для верификации диагноза, поставленного с помощью видоспецифичных праймеров, полученные ПЦР-продукты были секвенированы. Последовательность нуклеотидов рибосомальной ДНК спор первого морфотипа показала строгое соответствие сиквенсу N. apis, депонированному в Генбанке под номером доступа U97150, и отличие от сиквенса N. ceranae (номер доступа U26533) на 8,4%. Аналогично, последовательность нуклеотидов рДНК спор второго типа показала строгое соответствие сиквенсу N. ceranae депонированному в Генбанке под номером доступа U26533, и отличие от сиквенса N. apis (номер доступа U97150) на 15,7%. Таким образом, подтверждена пригодность метода видоспецифичной ПЦР-диагностики для наших исследований. (Зинатуллина и др., 2011)

На основании полученных данных нами были разработаны «Методические наставления по дифференциальной диагностике Nosema apis и Nosema ceranae у медоносной пчелы (Apis mellifera L.)», утвержденные 25 октября 2011 года отделением ветеринарии МСХ. (Зинатуллина и др., 2011)


В Тюменской области нозематоз регистрировали в течение длительного времени. В частности, в середине 70-х годов выявление нозематоза на пасеках в этом регионе проводил с.н.с. ВНИИВЭА Н.Г. Сидоров. В период с 2005 по 2010 гг. нами были исследованы пробы пчел с пасек Тюменской области на наличие возбудителей нозематоза. В результате проведённой работы было выявлено 76,5 % неблагополучных пасек из 106 обследованных. В 20% проб выявлена легкая степень поражения нозематозом, в таком же объеме зарегистрирована средняя степень и в 6% - сильная степень поражения пчелиных семей (Домацкая и др., 2010).

В 2012 году нами исследована 221 проба пчел от 34 пасек Тюменской области. В 40,75% пробах пчёл с 22 пасек обнаружили возбудителей нозематоза. На 9 пасеках Тюменского, Аромашевского, Исетского, Вагайского районов выявили возбудителя Nosema apis, на 9 пасеках Тюменского, Заводоуковского, Ярковского районов обнаружили микроспоридии Nosema ceranae, на 4 пасеках Исетского, Тюменского и Нижнетавдинского районов зарегистрировали обоих возбудителей нозематоза пчёл.

На некоторых пасеках установили источники возникновения заболевания пчелиных семей. Например, пасека в п. Боровский была основана в 1985 году, при завозе пчелопакетов из пасек Краснодарского края. С тех пор и до настоящего времени регистрируется нозематоз на пасеках в данном населенном пункте. На ст. Подъём образованию пасеки способствовала поимка роя с соседней пасеки в 1985 году, где ежегодно отмечают клинические признаки нозематоза у 10-20% семей. Пасеку в д. Дубровное в 2008 году пополнили пчелопакетами из Пермского края (Токарев и др., 2010), где впоследствии через три недели отмечали вспышку нозематоза в конце июня. До сих пор остается неясным вопрос, какая популяция возбудителя дала вспышку: местная или завезенная с пакетами. В д. Кулига в 2005 году пасеку восстановили пчелопакетами. В 2007 году в д. Кулига провели обследование пасеки и отбор проб пчел. В 54% проб от 24 пчелиных семей были обнаружены споры возбудителя нозематоза с разной степенью поражения пчёл.

Нами было проведено исследование проб пчел с пасек различных регионов России, результаты которых представлены в таблице 1.

Таблица 1. Распространение возбудителей нозематоза на пасеках России


Субъект РФ

Количество исследованных
проб пчёл

Из них заражено нозематозом

Nosema apis

Nosema ceranae

Тюменская область

241

50

55

Ленинградская область

72

22

14

Новгородская область

31

19

0

Псковская область

3

0

0

Тверская область

3

0

1

Смоленская область

4

0

0

Республика Татарстан

3

1

1

Нижегородская область

3

0

2

Тамбовская область

1

0

1

Брянская область

6

0

1

Липецкая область

18

1

10

Краснодарский край

4

0

3

Алтайский край

7

2

1

Итого

396

95

89


В результате проведенных исследований нами выявлено широкое распространение обоих возбудителей на пасеках России. При этом отмечено значительное количество пчелиных семей (49,86%) пораженных нозематозом, из них в 51,63% проб обнаружен Nosema apis, а в 48,37% Nosema ceranae. 


Таким образом, проведенные нами исследования позволили выявить два вида возбудителя нозематоза пчел на пасеках России. В России в ветлабораториях проводят диагностику нозематоза методом световой микроскопии и при обнаружении Nosema-подобных спор патоген определяют как Nosema apis. Для понимания картины распространения обоих патогенов на территории России и связанной с ними опасности для пчеловодства необходимо продолжение исследований. В связи с этим, мы предлагаем заинтересованным пчеловодам отправлять нам пробы пчел для исследования распространения возбудителей нозематоза медоносных пчел на пасеках России.
Исследования поддержаны грантом РФФИ № 12-04-90727-моб_ст.

Литература

  1. Методические указания по лабораторным исследованиям на нозематоз медоносных пчёл. Утв. ГУВ МСХ СССР 25.04. 1985 г. М., 1985. 3 с.
  2. Зинатуллина, З.Я., Методические наставления по дифференциальной диагностике Nosema apis и Nosema ceranae у медоносной пчелы (Apis mellifera L.) / Зинатуллина, З.Я., Жигилева О.Н., Токарев Ю.С. и др. //Сб.науч.тр./Труды ВНИИВЭА. Вып.51. Тюмень. 2010. С. 286-300.
  3. Зинатуллина, З.Я. «Азиатский» нозематоз в России. /З.Я. Зинатуллина, А.Н. Игнатьева, О.Н. Жигилева, Ю.С. Токарев/ Пчеловодство. № 11. С. 24-26.
  4. Домацкая, Т.Ф. Основные болезни медоносных пчел на пасеках Тюменской области (эпизоотология, диагностика, профилактика, меры борьбы) / Т.Ф. Домацкая, Н.М. Столбов, О.А. Модин и др. // Тюмень: ООО «Делс», 2010. С. 31.
  5. Cотников, А.Н. Причины гибели пчел / A.Н. Cотников, О.Ф. Гробов // Пчеловодство. 2003. № 7. C. 30–32.
  6. Токарев, Ю.С. Молекулярная диагностика нозематоза / Ю.С. Токарев, А.Н. Игнатьева, З.Я. Зинатуллина // Пчеловодство. 2010. С. 18–19.
  7. Цандер, Е. Болезни и вредители пчёл. / М.: «Новая деревня», 1927. С. 30-40.
  8. Chauzat, M.P. Presence of Nosema ceranae in French honeybee colonies / M.P. Chauzat, M. Higes, R. Martin-Hernandez e. a. // J. Apicult. Res. 2007. Vol. 46. P. 127–128.
  9. Chen, Y., Nosema ceranae is a long-present and wide-spread microsporidean infection of the European honey bee (Apis mellifera) in the United States./ Y. Chen, J.D. Evans, I.B. Smith, J.S. Pettis/ J. Invertebr. Pathol. 2008. Vol. 97. P. 186–188.
  10. Fries, I. Nosema ceranae n. sp. (Microspora, Nosematidae), morphological and molecular characterization of a microsporidian parasite of the Asian honey bee Apis cerana (Hymenoptera, Apidae). / I. Fries, F. Feng, A. da Silva, S.B. Slemenda, N.J. Pieniazek // Europ. J. Protistology. 1996. Vol. 32. P. 356–365.
  11. Fries, I., //J. Invertebr. Pathol. 2010. Vol. 103. Р. 73-79.
  12. Higes, M. El sindrome de despoblamiento de las colmenas en Espana. Consideraciones sobre su origen. / M. Higes, R. Martin, A. Sanz e.a. // Vida Apicola. 2005. Vol. 133. P. 15–21.
  13. Klee, J. Widespread dispersal of the microsporidium Nosema ceranae, an emergent pathogen of the western honey bee, Apis mellifera / J. Klee, A. Besana, E. Genersch e.a. // J. Invert. Path. 2007. Vol. 96. P. 1–10.
  14. Martín-Hernández, R., Outcome of colonization of Apis mellifera by Nosema ceranae. / R.Martín-Hernández, A.Meana, L.Prieto, A.Martinez Salvador, E.Garrido-Bailon, M.Higes // Appl. Environ. Microbiol. 2007. Vol. 73. P. 6331–6338.
  15. Paxton, R.J., Nosema ceranae has infected Apis mellifera in Europe since at least 1998 and may be more virulent than Nosema apis. / R.J. Paxton, J. Klee, S. Korpela, I. Fries // Apidologie. 2007. Vol. 38. Р. 558–565.
  16. Zander E. Tierische Parasiten als Krankheitserreger bei der Biene / E.Zander // Leipziger Bienenztg. 1909. Vol. 24. P. 147–150.





Количество просмотров: 7010

Поделитесь с друзьями:

Подпишитесь на обновления
сайта по e-mail:


Назад в раздел


Комментарии
Прикрепить файл
Отправляя комментарий я соглашаюсь с условиями политики конфиденциальности